Диагностика протозойных болезней

У человека возбудителями протозойных болезней могут быть некоторые патогенные простейшие животные (тип Protozoa). К их числу относятся: амебиаз, лямблиоз, балантидиаз, вагинальный трихомониаз, лейшманиозы (висцеральный и кожный), малярия, токсоплазмоз, кокцидиоз, пневмоцистоз (интерстициальная пневмония у детей; у ВИЧ-инфицированных выделяют Pneumocysta carinii).

Методы лабораторной диагностики заболеваний, вызываемых простейшими, обитающими в кишечнике человека (амебы, лямблии, балантидии, кокцидии), идентичны. Из 6 видов амеб, обнаруживаемых в кишечнике человека, патогенен лишь один вид амебы — Entamoeba histolytica, который, помимо язвенного поражения толстой кишки и бессимптомного носительства, может вызывать внекишечные поражения: печени (абсцессы печени, чаще поддиафрагмальные, гнойные гепатиты), легких, головного мозга, кожи и других органов.

Из жгутиковых простейших безусловно патогенной является Lamblia intestinalis, которая вызывает неустойчивый стул, рецидивирующие энтериты, иногда протекающие с дизентериеподобной клиникой, а также поражения печени и желчного пузыря (гепатиты, холециститы, холангиты). Возможно бессимптомное носительство лямблий, которые служат источником заражения здоровых людей.

Из споровиков в кишечнике человека паразитирует один вид -Ysospora belli, вызывающий сравнительно редко встречающийся кокцидиоз. Инфузория — Balantidium coli вызывает у человека балантидиаз, источником инфекции при котором часто являются свиньи; заболевание протекает в виде колитов, часто рецидивирующих, иногда эрозивно-язвенных.

Лабораторный диагноз протозойных заболеваний ставится на основании обнаружения в кале (свежем, теплом), соскобах со слизистой кишки (при сигмоскопии и колоноскопии), в пунктатах абсцессов и других цист и вегетативных форм простейших, правильная идентификация которых и частота находок зависят от квалификации работников клинической лаборатории.

В последние годы появилась возможность культивирования простейших, а также проведения серологических реакций и аллергических проб, в частности, при обследовании на лейшманиоз и токсоплазмоз. Большое клиническое значение (нередко — решающее и определяющее судьбу больного малярией) имеет умение находить в периферической крови плазмодиев малярии как в мазках крови, так и методом «толстой капли».

Диагностика гельминтозов

Сходная клиническая картина при различных гельминтозах, а также наличие общих симптомов с заболеваниями желудочно-кишечного тракта другой этиологии (протозоозы, хронические колиты, частые дуодениты и др.) выдвигает на первый план значение лабораторного диагноза.

Для обнаружения гельминтов исследуют фекалии, дуоденальный сок, желчь, ректальную и перианальную слизь, мокроту, мочу, мышечную ткань, кожу, кровь и др. Исследуют фекалии не более суточной давности; берут около столовой ложки из разных мест в чистую стеклянную посуду (например, в хорошо отмытый пенициллиновый флакончик). Сначала фекалии осматривают невооруженным глазом для выявления аскарид, остриц, члеников цестод. Для оценки эффективности дегельминтизации исследуют всю суточную порцию фекалий в период лечения и несколько дней спустя. Фекалии, смешанные с водой, просматривают небольшими порциями в проходящем свете на черном фоне в чашках Петри или черной кювете. Для обнаружения мелких гельминтов (самцов остриц, трихинелл и др.) все подозрительные комочки кала помещают в каплю воды на предметное стекло и просматривают с помощью лупы

Основной поиск яиц и члеников гельминтов проводят после применения специальных способов (отстаивания, обогащения, всплывания и др ) Исследуют фекалии и нативные мазки на предметных стеклах, под микроскопом при малом увеличении (в 60-80 раз) в затемненном поле зрения Подозрительные находки сверяют с оригиналом (имеются специальные атласы или рисунки для идентификации гельминтов)

Для лабораторной диагностики гельминтозов применяются также серологические и аллергологические методы Серологические реакции (РСК) ставят с антигенами из ткани гельминтов (аскарид, трихинелл), на латексе — при эхинококкозе и цистецеркозе головного мозга. РГА применяется для диагностики шистосомозов, трихинеллеза, эхинококкоза.

Внутрикожные аллергические пробы со специально приготовленными аллергенами применяют для диагностики эхинококкоза, филяриоза, парагонимоза Некоторые пациенты эти пробы переносят тяжело, с развитием общих аллергических реакций вплоть до анафилактического шока, что следует учитывать при их назначении (внутрикожные пробы нежелательно проводить лицам с отягощенным аллергоанамнезом)

В стадии обызвествления некоторых гельминтов в тканях и органах для их обнаружения оказался эффективным рентгенологический метод, в частности, для диагностики эхинококкоза (легких, плевры), цистецеркоза (мышц), мочеполового шистосомоза Возможно также применение УЗИ и компьютерной томографии (КТ) при некоторых видах гельминтозов.

Ключевые методы лабораторной диагностики распространенных инфекций

Современные методики лабораторной диагностики инфекций позволяют выявить болезнь на раннем этапе, в том числе при отсутствии симптомов.

ПЦР — метод лабораторной диагностики, позволяющий определить наличие возбудителя болезни, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул его ДНК или РНК.

Иммуноферментный анализ — один из самых распространенных и точных методов для выявления острых и хронических инфекционных заболеваний.

Людям, ведущим активную сексуальную жизнь, рекомендуется каждые шесть месяцев проходить комплексное обследование на ИППП.

Для того чтобы результаты анализов были максимально достоверными, необходимо правильно подготовиться к их сдаче.

Спецпредложения, скидки и акции помогут существенно сэкономить на медицинском обследовании.

Контроль качества лабораторных исследований, осуществляемый по международным стандартам, — дополнительная гарантия точности результатов анализов.

Инфекционные болезни — это заболевания, вызванные проникновением в организм бактерий, грибков или вирусов. Самая важная часть диагностики инфекций — это определение возбудителя и его концентрации. Для этих целей используются разнообразные лабораторные методы, которые позволяют выяснить, чем именно и как давно атакован организм, а в некоторых случаях — спрогнозировать эффективность лечения тем или иным препаратом.

Особенности диагностики инфекционных заболеваний

В клинической практике данный тип заболеваний встречается очень часто. Именно они, по данным Всемирной организации здравоохранения, становятся причиной 26% всех смертей. В список самых распространенных инфекционных заболеваний входят инфекционная пневмония и другие воспалительные заболевания дыхательных путей, гепатит, ВИЧ, туберкулез, малярия, воспаления органов половой системы и мочевыводящих путей, гистоплазмоз, ротавирусные инфекционные заболевания, ветряная оспа, герпес, вирус папилломы человека и еще несколько десятков болезней. Хотя бы раз в жизни каждый из нас сталкивается с инфекционными заболеваниями и необходимостью быстрой постановки диагноза.

Все инфекционные болезни делятся на пять типов — прионные, вирусные, бактериальные, протозойные и грибковые поражения. Далее будут рассмотрены последние четыре типа как наиболее распространенные. Разные возбудители иногда могут вызывать одно и то же заболевание. В частности, пневмония может быть результатом как вирусной, так и бактериальной инфекции. Лечение зависит не от проявлений, а от возбудителя болезни. Противовирусные препараты бесполезны в борьбе с бактериями и грибками, антибиотики не действуют на вирусы. Поэтому основная задача лабораторной диагностики инфекционных заболеваний — выявление типа возбудителя.

Способы лабораторной диагностики инфекционных болезней можно разделить на два типа: неспецифические и специфические методы.

К неспецифическим относятся общий анализ крови и исследование соотношения ее белковых фракций, печеночные пробы, общий анализ мочи и кала. Эти методы не дают информации о виде возбудителя, но позволяют узнать, в какой мере болезнь затронула органы и системы организма, что именно в их работе нарушено и насколько далеко зашел процесс.

Специфические — вирусологический и бактериологический методы, микроскопическое исследование возбудителей, анализы на антигены и антитела — направлены непосредственно на обнаружение возбудителя.

Методы лабораторной диагностики бактериальных инфекций

Современная медицина располагает множеством методов выделения возбудителей бактериальной инфекции:

Бактериоскопический. Исследуется окрашенный специальным образом мазок.

Бактериологический. Биоматериал высеивается в питательную среду, и через некоторое время специалист исследует колонию бактерий, выросшую в ней.

Биологический. Направлен на определение патогенности микроорганизмов.

Серологический. Выявляет антитела и антигены в сыворотке крови — особые вещества, которые вырабатываются организмом при контакте с возбудителем определенной болезни.

Чаще всего для исследований используют кровь или сыворотку крови, реже — слюну, мочу, кал, клетки эпителия (мазок и соскоб) и другой биоматериал.

Диагностика вирусных инфекций

В лабораторной диагностике вирусных заболеваний используются:

Вирусологическое исследование. Световая и электронная микроскопия дает возможность выявить наличие вирусных включений и сами вирусы и идентифицировать их.

Серологическое исследование для обнаружения антител и антигенов. Этот метод дает возможность быстро выявить агрессора, как и в случае с бактериальными инфекциями. Для диагностики используются разнообразные способы исследования материала — реакции гемадсорбции, гемагглютинации или метод непрямой иммунофлюоресценции. Имунноблоттинг, в частности, позволяет выявлять антитела сразу к нескольким инфекциям и считается современным и точным диагностическим методом.

Молекулярно-генетические методы. Последнее слово в лабораторной диагностике. Позволяют обнаружить вирус даже тогда, когда его концентрация ничтожно мала — то есть на самых ранних стадиях. Самым известным из этих методов является ПЦР, при которой фрагмент вируса многократно копируется до тех пор, пока специалист не получит достаточно материала для определения типа вируса и его изначальной концентрации.

Для выявления вирусов обычно требуется сделать анализ крови.

Методы диагностики протозойных инфекций

Так называют инфекции, вызванные простейшими паразитами, например, амебами. Малярия, амёбиаз, токсоплазмоз, лямблиоз, трихомониаз, сонная болезнь — вот неполный список самых распространенных протозойных инфекций. Лабораторная диагностика таких заболеваний включает в себя следующие методы:

Микроскопический. Простейшие паразиты выявляются путем исследования под микроскопом окрашенных образцов биоматериала. Самый простой и надежный метод для многих возбудителей.

Культуральный. Посев биоматериала в питательную следу для дальнейшего исследования размножившихся простейших. У этого метода есть существенный недостаток: результатов нужно ждать долго, сам процесс может занять не менее 5-6-ти дней.

Серологический. Используют редко ввиду малой информативности.

Аллергический. Также не является распространенным. Кожные аллергопробы делают для того, чтобы подтвердить лейшманиоз и токсоплазмоз. Это вспомогательный диагностический метод.

В качестве биоматериала для исследований в основном используется кровь, иногда — – кал или моча.

Диагностика грибковых инфекций

Грибковые инфекции распространены не так широко, как вирусные или бактериальные потому, что они поражают в основном людей с ослабленным иммунитетом. Обычно при словах «грибковая инфекция» люди думают о заболеваниях кожи и ногтей, но сфера деятельности микозов шире: они могут поражать практически любые ткани. Самые распространенные грибковые поражения – это кандидоз, или молочница, микозы стоп, аспергиллез. При диагностике грибковых инфекций чаще всего используются следующие лабораторные методы:

Микроскопическое исследование. Препарат окрашивается и рассматривается под мощным микроскопом. Посредством иммунофлюоресцентной микроскопии исследуется проба, помеченная флюоресцеинами — специальным красителем. Наиболее быстрый способ выявления грибка по сравнению с другими методами.

Культуральный. Происходит посев пробы на питательную среду и дальнейшее исследование полученной в результате колонии грибков.

Серологический. Используется для выявления грибковых поражений, однако для микозов он считается не особенно точным.

Гибридизация нуклеиновых кислот. Самый современный способ выявления грибковых инфекций, его применяют для идентификации основных возбудителей системных микозов. Из культуры извлекается РНК и вносится особым способом помеченная молекула ДНК. Если в пробе наличествует один из основных патогенных грибков, ДНК объединится с его РНК, создав легко различимую структуру. Несомненным преимуществом метода является возможность определить инфекцию на самых ранних стадиях.

Биоматериалом для исследований являются клетки кожи, волос и ногтей, клетки слизистых оболочек (мазок или соскоб), мокрота, моча, секрет простаты, сперма, грудное молоко.

Современные методики диагностики инфекций позволяет выявить их на начальном этапе, Чем раньше болезнь будет обнаружена, тем проще ее вылечить. Поэтому сдавать анализы на инфекции желательно регулярно, даже если вы ни на что не жалуетесь и не замечаете никаких перемен в самочувствии.

Где можно сдать биоматериал на анализ инфекции

«На первый взгляд может показаться, что все диагностические лаборатории одинаковы, — говорит эксперт лаборатории «Инвитро». – Но это не так. Современная диагностика инфекций требует наличия дорогостоящего оборудования и материалов, а также специалистов высокого класса. Далеко не все лаборатории могут позволить себе технику последнего поколения, и пока очень немногие используют такие новейшие методы, как ПЦР и гибридизация нуклеиновых кислот. А ведь если речь идет о вашем здоровье, точность и быстрота исследований наверняка важнее, чем цена! Я рекомендую обращаться только в крупные лаборатории с собственными исследовательскими комплексами, новым оборудованием и широкой филиальной сетью. Желательно, чтобы в такой лаборатории действовала система контроля качества – это гарантия точности результатов».

P.S. «ИНВИТРО» — крупнейшая частная сеть лабораторий страны, проводит более 1000 видов исследований. Ежедневно ее пациентами становятся 24 000 человек. Результаты анализов признаются всеми медицинскими учреждениями России.

Лицензия на осуществление медицинской деятельности ЛО-50-01-008046, 13.09.2016 г.

Что такое протозойные инфекции — возбудители и методы диагностики, лечение и профилактика

Простые одноклеточные микробы способны нанести человеку большой вред, убить иммунную систему и сделать уязвимым к привычным болезням. Протозойные инфекции, возбудителями которых являются паразиты, при попадании в организм могут спровоцировать серьезные (даже смертельные) заболевания. В мире существует много видов патогенных микроорганизмов, но не все они одинаково опасны.

Что такое протозойные инфекции

В процессе жизнедеятельности большинство микробов используют органические вещества, которые есть в организмах людей, домашних животных. Угрозу здоровью человека представляют только 50 видов паразитов. Протозойные инфекции – это паразитарные инфекции, которые способны оккупировать здоровые органы и ткани тела. Некоторые микроорганизмы не вредят человеку со здоровым иммунитетом, но для пациентов с вирусом иммунодефицита могут стать смертельным приговором. Клиническая картина болезни зависит от вида протозооза, диагностики и выбора метода лечения.

Где можно заразиться паразитами класса протозоозов (основные пути попадания возбудителя в организм человека):

• употребление плохо помытой еды или неочищенной воды;
• нарушение правил гигиены;
• контакт с болеющими животными (даже без признаков острого заболевания);
• укусы насекомых (они переносят инфекции);
• половой путь.

Возбудитель протозойной инфекции

Ученые выделяют одноклеточные микроорганизмы в отдельный класс «простейших». Возбудителями протозойной инфекции могут стать только те микроорганизмы, которые приспособлены к паразитарному образу жизни. Для их размножения не нужен половой путь, они способны быстро увеличивать свое количество в организме путем деления. Паразиты состоят из одной клетки, которая содержит все необходимое для жизнедеятельности и размножения. Жертвой протозойного заболевания может стать любой человек, ведь иммунная система организма не всегда может справиться с инфекцией.

Возбудитель заболеваний проходит в организме человека определенные этапы жизнедеятельности. Жизненный цикл паразитов состоит из 3 стадий:

• этап заражения человека (попадание возбудителя в организм);
• размножение, в результате которого создается большое количество паразитов;
• откладывание паразитом цист и выведение их из организма с фекалиями.

Болезни, вызываемые простейшими

Паразиты, попадая в организм человека, вызывают его интоксикацию и разрушают иммунную систему. Некоторые заболевания, вызываемые протозоозами, широко распространены в странах с жарким климатом и плохими санитарными условиями. В нашем регионе известны такие протозойные заболевания: лямблиоз, токсоплазмоз. Болезни, вызываемые простейшими, могут протекать бессимптомно, но в некоторых случаях (неправильная расшифровка результатов анализов, некачественное изучение симптомов либо упущенное время) могут привести к смерти.

По внешним признакам ученые выделяют несколько видов одноклеточных паразитов (протозоозов), способных вызвать протозойные заболевания:

• корненожки – представитель амеба;
• жгутиконосцы – опасный паразит лейшмания, трипаносомы (провоцируют сонную болезнь, переносятся мухой Цеце);
• ресничные инфузории – возбудитель балантидий;
• споровики – представитель малярийный плазмодий.

• Идеи для личного дневника своими руками: как красиво оформить
• Пирог из тыквы: рецепты с фото
• Почему возникает тупая, ноющая, давящая и резкая боль в районе солнечного сплетения

Симптомы протозойных инфекций

Признаки протозойных заболеваний отличаются в зависимости от вида возбудителя и работы иммунной системы организма, но есть и такие, которые характерны для большинства болезней. Симптомами протозойной инфекции могут быть диарея, рвота и расстройства желудочно-кишечного тракта, слабость в теле, повышенная температура, сонливость или воспаление слизистых оболочек. При обнаружении этих признаков, нужно пройти обследования (анализы крови, кала). Протозойные болезни могут протекать бессимптомно, а могут приобретать острую или хроническую (рецидивирующую) форму.

Амебиаз

Другие названия этой протозойной болезни – амебная дизентерия или «болезнь грязных рук». Амебиаз зачастую проходит бессимптомно, но бывают ситуации, когда его признаки путают с банальным аппендицитом, поэтому важна достоверность результатов лабораторных исследований и диагностики. Вероятность заражения этим паразитом выше в жарком климате, странах с низким уровнем санитарных условий. Возбудитель попадает в организм с загрязненной пищей. Инкубационный период длится от 1 недели до 2-3 месяцев.

Амебы, попадая в организм человека, вызывают нарушения в работе желудочно-кишечного тракта. Симптомы заражения:

• частая дефекация;
• кал с примесями крови, слизи;
• лихорадка;
• метеоризм, вздутие, диарея;
• болезненные ощущения в спине, животе;
• запоры.

Лямблиоз

Зачастую промежуточными хозяевами и носителями лямблий становятся собаки, кошки и домашний скот. Заражение протоозами происходит фекально-оральным путем. Для большинства случаев заболеванию характерно бессимптомное протекание, но оно может проявляться и в острой форме. Лямблиоз вызывают кишечные протозоозы, поэтому они, в основном, поражают желудочно-кишечный тракт. Особенно часто при заражении появляются такие симптомы: отсутствие аппетита, метеоризм, вздутие, жидкий стул, изжога, диарея и понос, боли в животе.

Малярия

Одна из самых опасных болезней, вызванных протоозами – малярия. Инфицирование происходит через контакт со слюной комара, симптомы проявляются через неделю после заражения. Малярия зачастую начинается с тяжелого течения, с повышением температуры до 40-41 градусов, сильной головной боли, нарушений сердечного ритма, одышки, анемии. После окончания приступа человек обильно потеет, температура спадает, состояние улучшается до следующего рецидива. При отсутствии лечения и помощи, болезнь может привести к церебральной малярии, смертельному исходу.

Разные виды возбудителей малярии отличаются симптомами и длительностью вызываемого протозойного заболевания:

• Plasmodium falciparum – возбудитель болезни тропическая малярия (высокая смертность);
• Р. vivax (вивакс-малярия) – возбудитель болезни 3-дневная малярия (приступы через 40-45 часов);
• Р. ovale – возбудитель болезни овале-малярия (приступы через 40-45 часов);
• Р. malariae – возбудитель болезни 4-дневная малярия (приступы через 72 часа).

Токсоплазмоз

Болезнь, вызванная токсоплазмами, зачастую носит хронический характер. Острая фаза встречается у пациентов очень редко, но может привести к летальному исходу. Переносят это заболевание кошки, возбудитель попадает в пищевой тракт через плохо вымытые продукты или сырое мясо. Очень опасно заражение токсоплазмозом для женщин, во время беременности недуг может передаваться плоду и вызывать пороки развития организма и даже гибели.

Часто симптомы протозойной инвазии токсоплазмозом путают с проявлениями гриппа, другими инфекциями или расстройствами желудочно-кишечного тракта. Признаки токсоплазмоза:

• лихорадка, повышение температуры;
• увеличение печени;
• головная боль, боль в животе;
• заболевания желудочно-кишечного тракта (рвота, диарея, запор, частая дефекация, метеоризм, вздутие).

• Курица по-китайски: рецепты
• Как похудеть в ляшках за неделю
• Как узнать телефон по фамилии

Диагностика протозойных инфекций

Для подтверждения предварительного диагноза проводят лабораторную диагностику протозойных инфекций. Зачастую лаборатории ограничиваются анализом кала или соскобом со слизистой оболочки толстой кишки, но более информативным является анализ крови на обнаружение следов паразита. Поскольку у паразитов есть способность размещаться в разных органах и тканях, необходимо точно определить предмет исследования. Это может быть моча, костный мозг, кровь, мокрота.

Методы лабораторной диагностики на наличие в организме разных видов паразитов

Дизентерийные амебы (корненожки)

Анализ кала, анализ крови мало информативен.

Мазки кала и слизи.

Жгутиконосцы (трихомонады, лямблии, лейшмании)

Споровики (малярия, бабезиоз, кокцидоз, изоспороз)

Исследования мазков крови и толстых капель крови.

Анализ кала на протозоозы

Основная задача исследования фекалий – выявить цисты паразитов, которые выходят из организма. Анализы кала на протозоозы проводятся при подозрении на заражение, при поступлении в детские учреждения и во время госпитализации. Чтобы результаты были достоверными, нельзя принимать перед забором кала слабительные препараты. Фекалии нужно собрать в чистую банку, без мочи, поставить в прохладное место и на протяжении 10-12 часов занести на лабораторные исследования. Если нужно обнаружить живые микробы, кал на копрограмму сдают не позднее, чем через час после сбора.

Лечение протозойных инфекций

Каждый возбудитель имеет свои особенности, поэтому схема лечения очень отличается в зависимости от симптомов. Лечение протозойных инфекций зачастую проводят в условиях стационара, особенно если есть симптомы острого течения заболевания. Для быстрого снятия тяжелых симптомов, приступов и рецидивов используют антибактериальные препараты, но их можно применять только наблюдаясь у специалиста. Если обнаружены негативные изменения в работе организма или другие признаки, необходимо обязательно посоветоваться с врачом.

Обезопасить себя от риска заражения инфекцией можно, если правильно проводить профилактику от протозойных заболеваний. Меры профилактики заключаются в следующем:

• качественное мытье еды;
• термическая обработка мяса и рыбы;
• соблюдение правил содержания животных;
• при контакте с грунтом надевать защитные перчатки;
• личная гигиена;
• минимальное посещение стран с высоким риском заражения паразитами;
• защита от насекомых-носителей.

Антипротозойные препараты

Для того чтобы вылечить протозойные заболевания, необходимо использовать противомалярийные и противоамебные лекарственные препараты. Они отпускаются по рецепту врача, существуют разные формы выпуска. Антипротозойные препараты нельзя применять без консультации с врачом, ведь только специалист может назначить правильную дозировку и метод применения (зависит от клинической картины пациента). Взаимодействие с другими лекарственными средствами и влияние на организм больного с хроническими болезнями не изучено. В таком случае схема лечения требует корректировки.

Лечение Трихополом

Для устранения бактериальных инфекций применяют разные лекарственные препараты, один из самых эффективных Трихопол. Существуют разные формы выпуска лекарства: для орального или наружного применения. Препарат назначают для лечения инфекций дыхательных путей, при заболеваниях кожи (также внешних половых органов) и поддержки центральной нервной системы Курс лечения препаратом Трихопол не менее 10 дней, желательно перейти на диетическое питание. Лечение Трихополом имеет побочные эффекты – уничтожение полезных бактерий, появление вторичных симптомов.

Основные методы лабораторной диагностики протозойных инфекций

Микроскопический метод направлен на выявление па­разитов в нативных и окрашенных препаратах. Материалом для исследования служат кровь, пунктаты грудины или лимфатических узлов, спинномозговая жидкость, соскоб с кожных элементов, фекалии, дуоденальное содержимое, отделяемое слизис­той оболочки наружных половых органов или мочеиспускательного канала. Простейшие можно обнару­жить как в мазках, так и в гистологических препаратах, изготовленных из поражен­ных тканей. Разработано значительное число методов окраски простейших, среди которых наиболее часто применяется метод Романовского-Гимза.

Культуральный метод заключается в посеве исследуемого материала на среды, содержащие кровь или нативную сыворотку, яичный белок, углево­ды, аминокислоты и другие вещества(рН сред 7,0-7,6). Культивирование большинства простейших осуществляют обычно при 37 0 С, лейшманий и трипаносомпри 20-26 0 С. Результаты посевов учитывают визуально и микроскопическим методом ( препарат «раздавленная» капля) через 24, 48, 72, 120 часов. Дизентерийные амебы, балантидии, трихомонады, хиломастиксы проще выявить микроскопическими методами, однако при необходимости применяют культуральное исследование.

Серологический метод при протозойных инфекциях имеет вспомогательное значение. Применяется РА (американский трипаносомоз), РП (американский трипаносомоз, амебиаз), РСК (американский трипаносомоз, токсоплазмоз, висцеральный лейшманиоз, амебиаз), РИФ (американский трипаносомоз, малярия, токсоплазмоз, висцеральный лейшманиоз, амебиаз), РНГА (ток­соплазмоз), ИФА (токсоплазмоз, тропическая малярия, амебиаз, кожный и висцеральный лейшманиозы, американский трипано­сомоз).

Аллергический метод – кожные аллергические пробы применяются редко, обычно для под­тверждения диагноза кожного лейшманиоза (проба с лейшманином, реакция Монтенегро) и токсоплазмоза (проба с токсоплазмином).

Биологический метод (биопроба) применяется для подтверждения диагноза ряда протозоо­зов, а также в научных целях. Чувствительными животными для дизентерийных амеб и балантидий являются 2-3-недельные крысята, морские свинки, котята, щен­ки, золотистые хомячки; для лямблий — мыши; для лейшманий белые мыши и хомяки; для американских трипаносом — морские свинки; для африканских трипаносом – мартышки; для токсоплазм — белые мыши. Заражение животных осуществляют па­рентерально, в слепую кишку при лапаротомии, через длинный пластмассовый зонд или путем скармливания животным исследуемого материала.

В течение 30 дней после заражения микроскопическому исследованию подвергают кровь животных, мазки-отпечатки из органов или гистологические препараты из пора­женных тканей.

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ПРОТОЗОЙНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Малярия

Возбудителями тропической малярии является Plasmodium falciparum, трехдневной малярии — Plasmodium vivax, четырехдневной ма­лярии — Plasmodium malariae и трехдневной или овале-малярии — Plasmodium ovale. Малярийные плазмодии претерпевают половой цикл развития в организме комара рода Anopheles и бесполый цикл (шизогония – рис.41) — в орга­низме человека, поражая сначала клетки печени (тканевая шизогония), а затем эритроциты (эритроцитарная шизогония).

Микроскопический метод. Кровь на наличие плазмодиев малярии исследу­ют на стадии эритроцитарной шизогонии путем микроскопии обычных мазков и толстой капли, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Плазмодии, ци­топлазма которых окрашена в голубой цвет, а ядро в вишнево-красный, находят в эритроцитах.

Бесполые (эритроцитарные) формы па­разитов имеют некоторые морфологические особенности. В частности, мерозоит представляет собой круглую или овальную форму с небольшим участком цитоплазмы около ядра; кольцевидный трофозоит — одноядерную форма с уз­ким ободком цитоплазмы, окружающим небольшую вакуоль; амебовидный трофозоит — одноядерную форму с различным количеством и величиной псевдоподий; шизонт содержит два или несколько ядер; морула характеризуется полным разделением ядра и цитоплазмы на мерозоиты.

Половые формы плазмодиев (гаметоциты или гамонты) не содержат вакуолей и псевдоподий. Мужские (микрогаметоциты) и женские (макрогаметоциты) формы отличаются по величине и структуре ядра, интенсивности окраски цитоплазмы и размерам.

При микроскопии тонкого мазка при малярии находят обычно кольцевидные трофозоиты. У P. vivax, P. malariae, P. оvale они имеют размеры от 2 до 4 мкм, занимают около 1/3 диаметра эритроцита. Ядра у трофозоитов P. vivax и P. malariae круглые, у P. ovale — неправильной формы, крупные; ободок ци­топлазмы ровный, неширокий, суживается к ядру. Молодые кольцевидные трофозоиты P. falclparum мелкие (1,25-1,50 мкм), занимают примерно 1/6 часть диаметра эритроцита, имеют маленькое круглое ядро с тонким ободком цитоплазмы. Взрослые кольцевидные трофозоиты более крупные, занимают 1/3 диаметра эритроцита, ободок цитоплаз­мы толстый, резко суживающийся к ядру.

Амебовидные трофозоиты P. vivax отличаются разнообразием форм, размеров, наличием одной или нескольких псевдоподий, вакуолей, круглого или овального ядра, пигмента в виде темно-коричневых цитоплазматических зерен различной величины и формы. Амебовидные трофозоиты P. malariae округлые и овальные (нередко в виде ленты поперек эритроцита с продолговатым или вытянутым ядром), с короткими и широкими псевдоподиями, более темной цитоп­лазмой и пигментом, ядром непра­вильной формы.. Аме­бовидные трофозоиты P.falciparum в виде круглых или

Рис. 41. Основные стадии эритроцитарной шизогонии малярийных плазмодиев

овальных форм лишены вакуоли, имеют ядро круглой или неправильной формы, пигмент черного цвета, расположенный компактно, однако они, как правило, в периферической крови не обнаруживаются. Мо­лодые трофозоиты P. ovale имеют кольцевидную форму, бо­лее взрослые сходны с P. malariae.

Размеры шизонтов у возбудителей малярии увеличиваются по нарастающей в ряду P.vivax, P. ovale, P.falciparum.

Морула P. vivax содержит обычно от 14 до 16 беспорядочно расположенных мерозоитов, между которыми лежат глыбки пигмента. В моруле P. malariae около 8 крупных мерозоитов, расположенных в виде розетки; в моруле P.falciparum 8-24 мелких мерозоитов, занимающих часть эритроцита; в моруле P. ovale около 8 крупных мерозоитов с ядром неправильной формы. Гаметоциты Р. vivax (крупные), P. malariae (мелкие) и Р. ovale округлой или овальной формы; глыбки пигмента крупные, равномерно расположены в цитоплазме гаметоцитов. В женских гаметоцитах у края цитоплазмы обнаруживают компактное ядро темно-голубого цвета. Расположенное центрально ядро мужских гаметоцитов розовато-фиолетового цвета, крупное, рыхлое. Га­метоциты этих видов плазмодиев появляются и ис­чезают из периферической крови вместе с трофозоитами. Гаметоциты P.falciparum имеют характерную полулунную форму с ядром, расположенным в средней части цитоплазмы (у женских форм оно небольшое и компактное, у мужских — крупное и рыхлое). Пигмент окружает ядро в виде коротких палочек. Стадия развития гаметоцитов P.falciparum в эритроците существенно превышает длительность шизогонии. Эти гаметоциты выявляются в перифе­рической крови на 8-10 день после появления кольцевид­ных трофозоитов, продолжая поступать в кровь через несколько недель после их исчезновения на фоне отсутствия клинических симптомов малярии..

Эритроциты, пораженные P. vivax и P. ovale, увеличиваются в диаметре до 10-12 мкм, хуже окрашиваются по Романовскому —Гимзе; эритроциты, пораженные P. ovale, могут приобретать неправильную форму, иметь бахромчатый край. Морфология эритроцитов, содер­жащих P. malariae и P. falciparum, не меняется.

В эритроцитах, содержащих P. vivax на различных стадиях раз­вития, выявляются множественные мелкие азурофильные зерна (зер­нистость Шюффнера), при наличии в эритроцитах P. ovale зерна редкие и крупные (зернистость Джеймса), при обнаружении в эритроцитах кольцевидных трофозоитов P.falciparum можно выявить не­большое количество крупных азурофильных зерен (зернистость Маурера), а в тех случаях, когда возбудителем является P. malariae, в эритроцитах выявляют мелкую зернистость Циманна.

Морфология возбудителей малярии в толстой капле. Кольцевид­ные трофозоиты P. vivax, P. ovale, P. malariae обычно имеют оди­наковую величину, однако в толстой капле они часто дефор-

мируются, превращаясь в форму запятой или восклицательного знака; цитоплазма при этом концентрируется около ядра в виде округлого или треугольного комочка. Наряду с кольцевидными трофозоитами можно найти другие формы плазмодиев и определить вид воз­будителя.

Аналогичные превращения происходят и с кольцевидными трофо­зоитами P. falciparum, часть из которых сохраняет свою форму. Цитоплазма может разрываться, располага­ясь с двух сторон от ядра в виде «крыльев ласточки», нередко находят раздвоенные ядра. На других стадиях развития плазмодии малярии в периферической крови обычно не выявляются.

Для амебовидных трофозоитов P. vivax в толстой капле характерна деформация их цитоплазмы в виде двух или нескольких комочков, располагающихся около ядра.

Трофозоиты P. malariae в мазке выглядят как компакт­ные овальные или округлые образования с большим количеством пигмента.

На стадии морулы различные виды плазмодиев имеют разное количество мерозоитов и форму морулы. У P. malariae в толстой капле морула сохраняет форму розетки, шизонты и морулы P. ovale напоминают аналогичные формы P. malariae, однако ядро более крупное, пигмента меньше, встреча­ются неразрушенные пораженные эритроциты. При малярии, выз­ванной P. vivax, пораженные эритроциты так же не всегда раз­рушаются, сохраняется зернистость Шюффнера. У P. ovale, в отличие от P. vivax, ядра крупные, неправильной формы, отсутствуют крупные «разорванные» амебовидные трофозоиты, мерозоиты круп­ные и их меньше в моруле.

Женские гаметоциты (гамонты) P. vivax и P. malariae в толстой капле не удается отличить от взрослых трофозоитов. Мужские га­метоциты имеют крупное ядро, окруженное узким обод­ком бледно-голубой цитоплазмы с рассеянными по ней зернами пигмента. Гаметоциты P. falciparum имеют характерную полулун­ную форму.

Серологический метод — определение антител к плазмодиям малярии с помощью РИА или ИФА с диагностическими целями проводится редко.

Диагностика протозойных инфекций

Не все простейшие (Protozoa), паразитирующие у человека, являются возбудителями заболеваний. Для обнаружения вида возбудителя и подтверждения клинического диагноза не обойтись без методов лабораторной диагностики. Простейшие, поселившиеся в организме человека, могут находиться в разных стадиях своего развития.

Классы паразитов и исследуемые биоматериалы

Подразделяются простейшие на 4 класса:

• корненожки (Rhizopoda) – представлены у человека амёбами;
• жгутиконосцы (flagellata) – основной патологический представитель – лейшмании;
• ресничные (ciliata) инфузории – самый распространенный возбудитель болезни – балантидий;
• споровики (sporozoa) – опасный паразит этой группы – малярийный плазмодий.

При инцистировании микроорганизм приобретает округлую форму и покрывается защитной оболочкой. В форме цисты простейшие становятся маловосприимчивыми к неблагоприятным факторам среды.

Локализация патогенных микроорганизмов может быть в разных органах и тканевых структурах. Поэтому выбор материала для исследования зависит от того, где может находиться паразит.

Исследованию могут подвергаться:

• кровь;
• костный мозг;
• содержимое абсцессов (в печени, легких, мозге);
• содержимое полостей (брюшной, плевральной, перикардиальной);
• мокрота;
• моча;
• кал;
• слизь и экссудаты кишечника, свищей.

Обратите внимание: разновидностей диагностики очень много, мы рассмотрим те виды, которые наиболее распространены в клинической лабораторной практике.

Частные виды диагностики

В каждом конкретном случае перед лаборантом ставится задача нахождения определенного возбудителя, иногда попутно с основным обнаруживаются и другие.

Диагностика корненожек (амёб)

Насчитывается 6 видов этого микроорганизма, способного к обитанию в кишечнике человека. Клиническое значение имеет только дизентерийная амёба, встречающаяся в вегетативной форме и в виде цист.

Основной путь обнаружения паразита – исследование в нативном (необработанном) биологическом препарате.

Дополнительно применяются иммунологические методы:

• непрямой иммунофлюоресценции;
• непрямой агглютинации (РНА);
• радиальной иммунодиффузии.

Обратите внимание: серологические методы малоинформативны и применяются лишь как дополнение к основным в сомнительных случаях.

Диагностика ресничных (инфузорий)

Патогенная форма микроорганизмов этого рода – балантидий. Это микроб, вызывающий балантидиаз – болезнь, сопровождающуюся язвенным процессом толстого кишечника. Возбудитель обнаруживается в нативном мазке в виде вегетативной формы и цисты. Материал для мазка (кал и слизь) забирается при ректороманоскопическом исследовании и высевается на специальные среды.

Диагностика жгутиконосцев (лейшманий, лямблий, трипаносом, трихомонад)

Для человека представляют опасность лейшмании, трипаносомы, лямблии, трихомонады.

Лейшмании – микробы, вызывающие лейшманиоз, исследуются в мазках крови, материалах костного мозга, соскобов из кожных инфильтратов. В некоторых случаях при диагностике лейшманий применяется посев на питательные среды.

Трипаносомы – возбудители сонной болезни (американский/африканский трипаносомоз, или болезнь Шагаса).

Африканский вариант определяют в начальном периоде при исследовании периферической крови. Патологические микробы при прогрессировании болезни находятся в материале пункций лимфоузлов, в запущенных стадиях – в спинномозговой жидкости.

Возбудителя Американского трипаносомоза в острую фазу болезни можно найти в жгутиковой форме. В дальнейшем безжгутиковые паразиты находятся в мышечных клетках, миокарде, в нейронах центральной нервной системы.

Для диагностики трипаносом при подозрении на болезнь Шагаса исследуемый материал обследуется под микроскопом при малом увеличении. При этом мазки и толстую каплю предварительно окрашивают.

Лямблии, ведущие паразитический образ жизни в двенадцатиперстной кишке находят в желчи или в анализе кала (цисты).

Трихомонады (кишечная, ротовая, влагалищная) обнаруживаются при микроскопии материалов, взятых из пораженных слизистых оболочек.

Выявление споровиков (малярийного плазмодия, возбудителя кокцидоза и пр.)

Споровики – паразитические формы, обитающие в клетках, тканях и полостях организма.

Наиболее распространенный и опасный для человека вид – малярийный плазмодий, имеющий 4 основные разновидности возбудителя: возбудитель трехдневной малярии, четырехдневной малярии, тропической малярии и малярии овале.

Половое развитие плазмодия (спорогония) проходит в комарах Анофелес. Бесполое (тканевая и эритроцитарная шизогония) – в печеночной ткани и эритроцитах человека. Эти особенности жизненного цикла обязательно учитываются при диагностике малярийного плазмодия.

Так, у только что заболевшего больного в крови можно обнаружить половые клетки цикла спорогонии. А вот на высоте малярийных приступов в крови в большом количестве появляются шизонты.

Более того, в разные фазы малярийной лихорадки проявляются различные формы плазмодия:

• в период озноба кровь наполняется мерозоитами, разновидностью шизонтов;
• на высоте температуры в эритроцитах скапливаются кольцевидные трофозоиты;
• снижение температуры характеризуется преобладанием амебовидных трофозоитов;
• в периоды нормального состояния кровь содержит взрослые формы шизонтов.

Исследование возбудителя малярии (малярийного плазмодия) проводится в мазке и в толстой капле.

Морфологические формы паразитов для четкой дифференциации анализируются путем специфического окрашивания. Этот вариант «визуализации» позволяет разобрать индивидуальные морфологические особенности той или иной разновидности микроорганизма.

Обратите внимание: диагностика малярии при исследовании мазков и толстых капель крови иногда бывает ошибочной. Тромбоциты крови в некоторых случаях могут ошибочно быть причислены к малярийному возбудителю. Также иногда симулируют плазмодий фрагменты лейкоцитов и других клеток.

Основные методы исследования простейших

Кратко ознакомимся с самыми распространенными методами исследования на наличие простейших.

Диагностика простейших методом нативного мазка и мазка, окрашенного раствором Люголя (в кале)

Препарат готовится из эмульсии кала в изотоническом растворе. На предметное стекло наносятся две капли натрия хлора и рядом раствор Люголя. В оба состава деревянной палочкой добавляют исследуемый материал и после накрывания стеклом просматривают в разных разрешениях микроскопа.

По определенным признакам регистрируют найденных простейших. Для точности готовят 2-3 препарата из одного материала. В сомнительных случаях анализ повторяют несколько раз на протяжении 2-3-х недель.

Методом можно обнаружить вегетативные и цистные формы:

• лямблий;
• балантидий;
• дизентерийной амебы.

Вместе с патогенными формами определяются и непатогенные простейшие. Также у здоровых носителей находятся просветные и цистные формы.

Важно: исследования во избежание неточностей и ошибок следует проводить неоднократно.

Результат диагностики простейших методом нативного и окрашенного мазка должен содержать описание формы возбудителя (просветная, циста, тканевая).

Требования к исследованию:

• забранный на анализ материал (жидкий кал) исследуется не позднее 30 минут после дефекации;
• оформленный кал необходимо подвергнуть диагностике в течение 2 часов после дефекации;
• в материале не должно быть примесей (дезинфицирующих средств, воды, мочи);
• для работы с материалом используют только деревянные палочки, стеклянные не пригодны из-за соскальзывания слизи;
• палочки после использования немедленно необходимо сжигать.

Метод консервации (исследование кала) при диагностике простейших

Исследование проводится путем фиксации простейших с консервантом. Отличие этого метода от предыдущего в том, что консерванты позволяют сохранить препарат в течение длительного периода.

Используемые консерванты:

• Барроу. Содержит консервирующие ингредиенты: 0,7 мл хлорида натрия, 5 мл формалина, 12,5 мл 96% спирта, 2 г фенола и 100 мл дистиллированной воды. Красящий состав: 0,01% раствор тионина (азура).
• Раствор Сафарлиева. Состав: 1,65 г сульфата цинка, 10 мл формалина, 2,5 г кристаллического фенола, 5 мл уксусной кислоты, 0,2 г метиленового синего, 100 мл воды. Этот консервант используется в случаях, когда материал должен храниться более месяца.

Консервантом наполняются пустые флаконы, в них переносят материал, в пропорциях 3:1, затем при необходимости добавляют краситель. Оценка результатов производится при исследовании 2-3-х препаратов.

Метод формалин-эфирного обогащения (анализ на наличие простейших в кале)

Этот способ диагностики позволяет отделить и сконцентрировать цисты простейших. Для анализа нужны следующие ингредиенты: формалин (10 мл), 0,85 г изотонического раствора, дистиллированная вода, серный эфир, раствор Люголя.

Смесь биоматериала с перечисленными жидкостями смешивают и центрифугируют. Полученный на дне пробирки осадок окрашивают раствором Люголя и исследуют на предмет наличия цист и вегетативных форм.

Метод нахождения лейшманий (мазок костного мозга)

Для диагностики лейшманиоза используются реактивы: смесь Никифорова (серный эфир и этиловый спирт), фосфатный буфер, Азур-эозин по Романовскому.

Вещество костного мозга очень осторожно помещают на предметное стекло после специальной подготовки. Используется микроскоп с иммерсионной системой.

В острый период болезни в пунктате обнаруживается большое количество лейшманий.

Обратите внимание: иногда кровяные клетки могут напоминать обработанные лейшмании, поэтому очень важно лаборанту быть внимательным и иметь достаточный опыт для самостоятельного исследования.

Метод обнаружения лейшманий в мазке из кожного инфильтрата

Необходимые реактивы аналогичны предыдущему анализу.

Исследуемый материал получают из имеющегося бугорка или язвенного содержимого. Соскоб при подозрении на лейшманиоз делается очень аккуратно скальпелем, без крови. Затем готовится препарат на стекле. Для точности получаемых результатов одновременно подвергают осмотру несколько препаратов.

При наличии заболевания среди присутствующих в исследуемом материале макрофагов, фибробластов, лимфоидных клеток определяются и лейшмании.

Метод выделения чистой культуры лейшманий, полученных путем соскоба патологических тканей

При этом способе диагностики простейших соскоб тканей помещают в специальную питательную среду, в которой происходит активное размножение лейшманий.

Перед забором соскоба кожу тщательно обрабатывают спиртом, затем делается надрез бугорка, со дна которого извлекается содержимое и помещается в пробирку со средой. Материал забирается несколько раз, после чего он помещается в разные пробирки. Затем в термостате при температуре 22-24 градуса происходит культивирование. Результаты оценивают под микроскопом. Этот метод применяется, когда другие, более дешевые и быстрые способы диагностики простейших неэффективны.

Увидеть, как на практике расшифровываются анализы на наличие простейших по капле крови, вы сможете, посмотрев видео-обзор:

Лотин Александр, медицинский обозреватель

11,506 просмотров всего, 2 просмотров сегодня

лямблии – анализ кала и мочи; лейшмании – мазки крови, исследования костного мозга. трихомонады – лабораторный анализ соскобов со слизистых оболочек.